Разработан метод ЖХ-МС/МС для количественного определения малых молекул в суррогатной матрице, ва... скачать в хорошем качестве

Разработан метод ЖХ-МС/МС для количественного определения малых молекул в суррогатной матрице, ва...

Доктор Праджита Панди, заместитель директора по химии компании Emery Pharma, представляет подход к разработке метода ЖХ-МС/МС для количественного определения малых молекул в стекловидном теле с использованием плазмы крови человека в качестве суррогатной матрицы. Исследование соответствует рекомендациям по валидации биоаналитических методов ICH M10, что гарантирует точность, надежность и воспроизводимость метода. Использование суррогатной матрицы позволяет решить ряд проблем биоанализа, таких как помехи от эндогенных аналитов и редких матриц. Суррогатная матрица имитирует исследуемую биологическую матрицу, что обеспечивает такие преимущества, как снижение влияния матрицы, повышение надежности метода и минимизация помех от эндогенных компонентов, что улучшает пределы обнаружения. Этот подход особенно полезен в случаях, когда природные матрицы нестабильны или редки. В исследовании в качестве биологической матрицы используется стекловидное тело, а в качестве суррогатной матрицы используется плазма крови человека. Рабочий процесс включает в себя введение исследуемого соединения X в плазму крови и стекловидное тело человека, добавление внутреннего стандарта и осаждение белка метанолом. Затем супернатант анализируется с помощью ЖХ-МС/МС. Валидация метода включает оценку специфичности, селективности, степени извлечения и переноса. Специфичность и селективность подтверждались путем сравнения хроматограмм бланковых образцов плазмы крови и стекловидного тела, что гарантировало отсутствие влияния исследуемого соединения X на время удерживания. Степень извлечения, которая составляла 80–98%, оценивалась путем сравнения образцов до и после добавления, что демонстрирует приемлемые показатели извлечения. Перенос, распространенная проблема в биоанализе, оценивался для того, чтобы убедиться, что отклик аналита в бланковых образцах был ниже 20% от нижнего предела количественного определения (НПКО), что соответствует рекомендациям ICH M10. Линейность и диапазон были проверены с помощью калибровочной кривой от 2,5 до 5000 нг/мл, а точность и достоверность были подтверждены многократными прогонами и анализами в течение нескольких дней. Значения точности находились в приемлемом диапазоне 85–115%. Были проведены исследования параллелизма для подтверждения пригодности суррогатной матрицы для количественного определения аналита. В этих исследованиях сравнивались контрольные образцы качества, приготовленные из плазмы крови человека и стекловидного тела, и результаты продемонстрировали приемлемую точность и прецизионность. Объединение стекловидного тела с плазмой крови человека дополнительно подтвердило применимость суррогатной матрицы. Исследование целостности разведения решало проблему неизвестных концентраций аналита выше калибровочной кривой. Были созданы два исходных раствора с концентрацией 3000 и 150 000 нг/мл, и разведение до целевых концентраций показало, что точность и прецизионность сохраняются даже после разведения. Исследования стабильности имели решающее значение для оценки влияния циклов замораживания-оттаивания, стабильности при комнатной температуре и условий работы автодозатора. Тестовое соединение X было добавлено в стекловидное тело и прошло три цикла замораживания-оттаивания при -80 °C, при этом значения точности оставались в приемлемом диапазоне. Стабильность в лабораторных условиях была подтверждена путем выдерживания образцов при комнатной температуре в течение четырех часов, а стабильность в автодозаторе – после 15 часов. Долгосрочная стабильность при хранении при -80 °C контролировалась до 9 недель с сохранением точности результатов. Подводя итог, можно сказать, что данный подход к разработке метода демонстрирует, как суррогатная матрица может эффективно использоваться для решения биоаналитических задач. Валидация данного метода в соответствии с рекомендациями ICH M10 гарантирует его надежность и воспроизводимость, оптимизируя будущие биоаналитические исследования и обеспечивая потенциальную экономию средств. О компании Emery Pharma: Компания Emery Pharma глубоко привержена развитию общественного здравоохранения и специализируется исключительно на проектах, улучшающих благополучие как людей, так и окружающей среды. Emery Pharma, являясь комплексной контрактной исследовательской лабораторией, оказывает всестороннюю поддержку по всему спектру фармацевтических разработок, включая низкомолекулярные препараты, биологические препараты, биоаналоги, генную терапию, растительные препараты и многое другое. Спектр услуг Emery Pharma премиум-класса включает аналитические и биоаналитические решения, услуги в области микробиологии и клеточной биологии, характеризацию лекарственных препаратов и примесей, а также комплексные исследования и разработки с поддержкой cGMP/GLP. Команда Emery Pharma специализируется на разработке инновационных решений, отвечающих уникальным требованиям каждого клиента. Они контролируют весь процесс – от первоначальной разработки препарата до тщательного анализа данных и формирования ан...