ОБЪЯСНЕНИЕ флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) скачать в хорошем качестве

ОБЪЯСНЕНИЕ флуоресцентной гибридизации in situ (FISH)

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) может использоваться для визуализации определенных участков хромосомы и даже выявления нарушений в ДНК хромосомы. FISH-анализ проводится в 4 основных этапа: 1. Сначала клетка фиксируется формальдегидом, который вызывает обширное сшивание между белками клетки и исследуемого образца. 2. Затем зонд конструируется следующим образом: сначала берется цепь ДНК, комплементарная исследуемому участку хромосомы. Затем ДНКаза, являющаяся эндонуклеазой, создает случайные «надрезы» (разрезы) в зонде. ДНК-полимераза 1 может присоединиться к ОН-концу этих надрезов, чтобы начать трансляцию и включение флуоресцентно меченых нуклеотидов. Таким образом, мы получаем комплементарный меченый зонд. Этот зонд можно амплифицировать с помощью ПЦР. 3. В-третьих, как зонд, так и целевая хромосомная ДНК денатурируются при нагревании клетки примерно до 95 градусов Цельсия. 4. Наконец, гибридизация может произойти после охлаждения клетки, позволяя зонду специфически связаться с целевой последовательностью ДНК. После связывания все несвязанные зонды смываются. ВАЖНО отметить, что гибридизация НЕВОЗМОЖНА, ЕСЛИ зонд НЕ ИДЕНТИЧЕН целевой последовательности ДНК. Другими словами, любые мутации могут быть обнаружены, поскольку хромосома НЕ будет флуоресцентно помечена. В данном случае, как мы видим, хромосома «светится» в определённом участке, что означает, что зонд успешно связался с целевой ДНК. В данном случае, напротив, хромосома не светится, что означает, что произошла мутация.