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western blot

Salut à tous, et bienvenue dans le laboratoire ! Aujourd'hui, je vous emmène à travers une technique incontournable pour tout chercheur en biologie : le Western blotting. 🧬 Que vous soyez un étudiant en biologie ou un pro du labo, cette vidéo est pour vous ! On va décortiquer ensemble chaque étape, depuis la préparation des gels, membrane jusqu'à la détection des protéines spécifiques. N’oubliez pas de liker, vous abonner, et d’activer la cloche pour ne rien rater de mes prochaines vidéos scientifiques. C’est parti ! 👨‍🔬🔬 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Le Western blot est une technique puissante utilisée pour détecter et quantifier des protéines spécifiques dans un échantillon. En séparant les protéines en fonction de leur taille, en les transférant sur une membrane, puis en utilisant des anticorps pour visualiser les protéines cibles, les chercheurs peuvent obtenir des informations précieuses sur les processus biologiques et les états pathologiques. Cette technique est essentielle dans divers domaines, tels que la biochimie, la biologie moléculaire et l'immunologie. Pour l'incubation avec l'anticorps primaire et l'incubation avec l'anticorps secondaire Après le blocage, vous incuberez la membrane avec l'anticorps selon les instructions fournies. Comme vous le savez, certaines incubations peuvent durer une heure, tandis que d'autres nécessitent une nuit complète. --------------------------------------------------------------------------------------------------------- Matériel nécessaire : Échantillons de protéines (extraits cellulaires, lysats, etc.) Électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE) Plaques de verre Gel de séparation et gel de concentration Tampon de chargement Échelle de poids moléculaire Membrane de transfert (nitrocellulose ou PVDF) Appareil de transfert électrophorétique Solution de blocage (BSA ou lait non gras) Anticorps primaire (spécifique à la protéine d'intérêt) Anticorps secondaire (couplé à une enzyme, généralement HRP) Solutions de lavage (TBS-T) Substrat de détection (chimioluminescent ou colorimétrique) Appareil d'imagerie (chemiluminescence ou scanner)